③固定時(shí)間在4～24 h之間，長(zhǎng)時(shí)間固定會(huì)影響抗原決定簇的暴露，且容易出現(xiàn)自發(fā)熒光及非特異性染色。

④抗原修復(fù)時(shí)，高壓時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，應(yīng)適當(dāng)縮短時(shí)間。

⑤烘干溫度為50℃，時(shí)間為12～24 h。

④脫蠟不全，可更換脫蠟劑或延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間。

②切片上滴加的試劑未覆蓋均勻或未覆蓋到全部組織，邊緣的試劑少，容易變干，導(dǎo)致邊緣的試劑濃度比中心區(qū)域的高，而使得染色結(jié)果偏深。滴加試劑時(shí)要均勻且充分覆蓋到全部組織，為防止邊緣水分減少，滴加試劑時(shí)可以適當(dāng)超出組織邊緣2 mm左右，保證組織部分覆蓋均勻。用組化筆畫(huà)圈時(shí)，距組織邊緣3-4 mm為宜，避免油劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

⑥抗原擴(kuò)散，嘗試使用交聯(lián)固定劑而不是有機(jī)（醇類(lèi)）固定劑。

解決方法：①不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過(guò)高，影響待測(cè)抗原的數(shù)量和質(zhì)量，應(yīng)根據(jù)組織選擇更適宜的固定方式及溫度。

③避免切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（大于 24 h）。

解決方法：①不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式，導(dǎo)致抗原決定簇暴露不足，需摸索修復(fù)條件，改變抗原修復(fù)方法。